Co to jest RNA wirusa zapalenia wątroby typu C?

Share Tweet Pin it

Badanie RNA wirusa zapalenia wątroby typu C jest najważniejszą procedurą, która pozwala z dużą dokładnością określić czas i metody leczenia pacjentów. Rozpoznanie choroby składa się z kilku różnych badań krwi, takich jak:

  • markery zapalenia wątroby typu C (anty-HCV);
  • wykrycie RNA wirusa zapalenia wątroby typu C (HCV RNA).

Pierwsze badanie wykonuje się przy pierwszym podejrzeniu zapalenia wątroby. Druga opcja jest najbardziej znacząca w leczeniu HCV RNA, więc rozważ to bardziej szczegółowo.

Co to jest wirusowe zapalenie wątroby typu C?

Wirusowe zapalenie wątroby typu C lub HCV jest chorobą zakaźną, która atakuje wątrobę. Zakażenie wirusem następuje przez krew. Możesz zarazić się transfuzją krwi, gdy zasady dotyczące sterylizacji instrumentów medycznych nie są przestrzegane. Jest mniej przypadków, gdy choroba jest uzyskiwana płciowo lub od ciężarnej matki do płodu. Wirusowe zapalenie wątroby typu C ma 2 typy.

Przewlekłe zapalenie wątroby typu C jest najbardziej niebezpieczne. Jest to choroba, która może trwać przez całe życie. Prowadzi to do poważnych problemów w funkcjonowaniu wątroby, takich jak marskość lub rak. U 70-90% zarażonych osób choroba przechodzi w stan przewlekły.

Najważniejszym niebezpieczeństwem zapalenia wątroby typu C jest to, że zachodzi on potajemnie, bez objawów żółtaczkowych. W tym przypadku najczęściej skarżą się na gorączkę, nudności i wymioty, osłabienie fizyczne, zwiększone zmęczenie, utratę apetytu i wagę. W tym przypadku, na tle małego zagęszczenia tkanek wątroby, często dochodzi do jego złośliwego zwyrodnienia. Z tego powodu wirusowe zapalenie wątroby typu C jest często określane jako "bomba zegarowa" lub "czuły zabójca".

Inną osobliwością choroby jest jej bardzo powolny rozwój, szacowany na kilkadziesiąt lat.

Co do zasady, zarażeni nie odczuwają żadnych objawów i nie podejrzewają ich prawdziwego stanu. Często choroba może być zidentyfikowana tylko w przypadku skierowania do lekarza w innej sprawie.

Grupa ryzyka obejmuje:

  • dzieci, które otrzymały wirusa zapalenia wątroby typu C od matek;
  • narkomani;
  • ludzie, którzy przebili części ciała lub zrobili tatuaże niesterylnymi narzędziami;
  • otrzymała krew lub narządy dawcy (do 1992 r., kiedy nie wykonano hemodializy);
  • ludzie zarażeni wirusem HIV;
  • Pracownicy medyczni w kontakcie z zakażonymi pacjentami.

Oznaczanie RNA wirusa zapalenia wątroby typu C.

Określenie HCV RNA wirusów, również nazywane zapaleniem wątroby typu C PCR tego badania materiału biologicznego (krwi), za pomocą których można określić w organizmie natychmiastowej dostępności genomateriala wirusa zapalenia wątroby typu B (dana wirus jest pojedynczą cząstką RNA).

Główną metodą badania jest PCR lub metoda reakcji łańcuchowej polimerazy.

Istnieją dwa rodzaje testów krwi do oznaczania HCV RNA:

Test jakości

Przeprowadzenie analizy jakościowej pozwala określić, czy wirus jest we krwi. Wszyscy pacjenci z przeciwciałami przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu C powinni przejść ten test. Dzięki jego wynikom można uzyskać 2 odpowiedzi: "obecny" lub "brakujący" wirus. Na dodatnim wyniku testu (znalezionym) można ocenić aktywne namnażanie wirusa, który infekuje zdrowe komórki w wątrobie.

Test, przeprowadzony w celu uzyskania wysokiej jakości reakcji PCR, został dostosowany do specyficznej czułości, od 10 do 500 IU / ml. Jeżeli wirus zapalenia wątroby znajdzie się we krwi o zawartości właściwej mniejszej niż 10 IU / ml, wykrycie wirusa może stać się niemożliwe. Bardzo niską wartość specyficznej zawartości wirusa obserwuje się u pacjentów, którym przepisano leczenie przeciwwirusowe. Dlatego ważne jest, aby czułość systemu medycznego była wysoka dla diagnozowania i ustalania jakościowego wyniku reakcji łańcuchowej polimerazy.

Często reakcję łańcuchową polimerazy zapalenia wątroby typu C przeprowadza się natychmiast po znalezieniu odpowiednich przeciwciał. Kolejne testy, kiedy przechodzi terapia antywirusowa, przeprowadzane są w 4., 12. i 24. tygodniu. Kolejna analiza po zakończeniu PVT jest wykonywana po 24 tygodniach. Następnie - raz w roku.

Test ilościowy

Ilościowa analiza PCR RNA, czasami określana jako obciążenie wirusem, określa stężenie (specyficzną zawartość) wirusa we krwi. Innymi słowy, pod wpływem obciążenia wirusowego rozumie się pewną ilość wirusowego RNA, które mogą być obecne w danej ilości krwi (nie uważano, aby stosować 1 ml 1 cm sześcianu). Jednostkami dla wyników testu są jednostki międzynarodowe (standardowe), podzielone przez jeden mililitr (IU / ml). Zawartość wirusa czasami wygląda inaczej, zależy to od laboratoriów, w których prowadzone są badania. W przypadku zapalenia wątroby typu C w ocenie ilościowej czasami stosuje się wartości takie jak kopie / ml.

Należy rozumieć, że nie ma szczególnej zależności od nasilenia zapalenia wątroby typu C od stężenia tego szczepu we krwi.

Sprawdzenie "miana wirusa" pozwala określić stopień zakaźności choroby. Ryzyko zarażenia się wirusem innej osoby wzrasta wraz ze wzrostem stężenia zapalenia wątroby we krwi. Ponadto wysoka zawartość wirusa zmniejsza efekt leczenia. Dlatego mały ładunek wirusa jest bardzo korzystnym czynnikiem dla pomyślnego leczenia.

Ponadto, test na zapalenie wątroby typu C, a jego definicja metodą PCR odgrywają ważną rolę w stosowaniu terapii choroby i określenia skuteczności leczenia. Na podstawie wyników testu planowany jest kurs rehabilitacji. Na przykład, przy zbyt powolnym zmniejszaniu się swoistego stężenia wirusa zapalenia wątroby, terapia przeciwwirusowa jest przedłużona i na odwrót.

We współczesnej medycynie przyjmuje się, że obciążenie przekracza 800 000 ME / ml. Obciążenie przekracza 10000000 ME / ml jest uważane za krytyczne. Jednak eksperci z różnych krajów i do tej pory nie mieli tej samej opinii na temat granic obciążenia wirusem.

Częstotliwość testu ilościowego

Ogólnie rzecz biorąc, analizę ilościową zapalenia wątroby przeprowadza się przed terapią przeciwwirusową i 3 miesiące po zakończeniu leczenia w celu określenia jakości terapii.

W wyniku tego badanie ilościowe będzie uważane za ilościową ocenę wyników próbki określonej powyżej. W rezultacie zostanie wydany wyrok "poniżej zmierzonego zakresu" lub "we krwi nie zostanie wykryty".

Parametr czułości testu jakościowego jest zwykle niższy niż czułość analizy ilościowej. Transkrypcja "brakująca" wskazuje, że oba rodzaje analiz nie wykryły RNA wirusa. W teście "poniżej zmierzonego zakresu" analiza ilościowa prawdopodobnie nie wykryła RNA wirusa zapalenia wątroby, chociaż potwierdza to obecność wirusa o bardzo małej, specyficznej zawartości.

Wirusowe zapalenie wątroby typu C i jego genotypy

Genotypów HCV RNA wirusa diagnozowania obecności różnych typów genetycznych wirusa zapalenia wątroby typu C, Science Wie więcej niż 10 rodzajów genomu wirusa, ale w praktyce medycznej wystarczająco wyróżnić kilka genotypów posiadających największy udział w tym regionie. Ustalenie rodzaju genetycznego odgrywa kluczową rolę w wyborze czasu leczenia, co jest bardzo konieczne, jeśli wziąć pod uwagę szeroki zakres skutków ubocznych leków przeciw zapaleniu wątroby.

Metody leczenia wirusowego zapalenia wątroby typu C

Jedynym skutecznym sposobem leczenia wirusa zapalenia wątroby typu B w postaci zasady jest kombinacja 2 leków: interferon alfa razem z rybawiryną. Oddzielnie, leki te nie są tak skuteczne. Zalecane dawkowanie leków i czas stosowania powinny być przepisywane tylko przez lekarza i indywidualnie każdemu pacjentowi. Leczenie tymi lekami może trwać od 6 do 12 miesięcy.

Dzisiaj nie wynaleziono leków, które gwarantują 100% odzyskiwanie wirusa. Jednak przy odpowiednio dobranym leczeniu gojenie pacjentów może osiągnąć nawet do 90% liczby przypadków.

Jakościowa analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C

Wirusowe zapalenie wątroby jest poważną chorobą, która ma wiele przyczyn na początku. Sercem rozwoju jest bezpośrednie lub pośrednie uszkodzenie wątroby. Biorąc pod uwagę jego znaczenie dla całego organizmu, można jedynie zgadywać, jak zła jest patologia. W tym artykule omówimy bardziej szczegółowo cechy kursu i diagnostykę laboratoryjną wirusowego zapalenia wątroby typu C.

Przyczyną choroby jest czynnik wirusowy, który odnosi się do patogenów zawierających RNA. Ma charakterystyczną cechę - zdolność do mutowania, to znaczy do zmiany swojej struktury. Z tego powodu infekcja wymyka się atakowi układu odpornościowego iw większości przypadków prowadzi do przewlekłego stanu zapalnego w wątrobie.

Biorąc pod uwagę istnienie różnych podtypów wirusa, wybór leków powinien być prowadzony z uwzględnieniem wyników genotypowania. Pomimo długiego badania choroby i specyfiki struktury HCV, nie było możliwe opracowanie specyficznej szczepionki przeciwko tej chorobie.

Trudności z wczesną diagnozą dotyczą bezobjawowego przebiegu zapalenia wątroby, czego skutkiem jest zwrócenie się do lekarza na etapie marskości. W celu wykrycia choroby na czas wymagane są regularne badania fizyczne. Tylko dzięki laboratoryjnym testom krwi można zidentyfikować HCV i zapobiegać infekcjom innych. Fakt, że nosiciel infekcji może przez długi czas nie wiedzieć o patologii i kontynuować przekazywanie wirusa zdrowym ludziom.

Ścieżki transmisji

W większości przypadków wirus rozprzestrzenia się przez krew, ponieważ zawiera największe stężenie czynników chorobotwórczych. W ten sposób infekcja jest przenoszona:

  • z hemodializą;
  • podczas nakłuwania igłą;
  • w trakcie walki, gdy skóra jest zraniona, i pojawia się hemocontact;
  • z transfuzją krwi (transfuzją krwi).

Prawdopodobieństwo infekcji w intymnej bliskości jest niewielkie, ponieważ nasienie i wydzielina z pochwy zawierają niewielką liczbę patogenów. Ryzyko zakażenia wzrasta znacznie, jeśli naruszona zostanie integralność błony śluzowej narządów płciowych. Obserwuje się to w przypadku agresywnego i analnego seksu.

W odniesieniu do pionowego sposobu przenoszenia infekcji, odbywa się to w procesie porodu. W okresie ciąży patogen nie może przeniknąć przez łożysko do zarodka. W typach naturalnych czynnik chorobotwórczy przenosi się na dziecko podczas urazu skóry, gdy obserwuje się kontakt z krwią matki.

Po wniknięciu patogenu do zdrowego organizmu rozpoczyna się synteza przeciwciał, które stanowią ochronę przed infekcją i należą do struktur odpornościowych. Można je znaleźć podczas wstępnego badania osoby za pomocą testu ELISA.

Aby potwierdzić diagnozę, pacjent przechodzi łańcuchową reakcję polimerazy. Jest to analiza mająca na celu identyfikację materiału genetycznego czynnika chorobotwórczego i określenie miana wirusa.

Diagnostyka laboratoryjna zapalenia wątroby typu C

Diagnostyka laboratoryjna rozpoczyna się od testu immunoenzymatycznego. Jego głównym zadaniem jest wykrywanie przeciwciał wytwarzanych przeciwko patogenowi. Jego sprawność wynosi prawie 95%. Dzięki tym badaniom na etapie przedklinicznym możliwe jest zidentyfikowanie nosiciela wirusa i wysłanie go do dalszego badania.

Jakościowa analiza ELISA wskazuje na obecność lub brak immunoglobulin we krwi pacjenta. Jego wynik może być "pozytywny" lub "negatywny". Po otrzymaniu pierwszego wariantu odpowiedzi, osoba przechodzi do następnego badania - PCR. Jego cena zależy od jakości odczynników i laboratorium. Koszt reakcji łańcuchowej polimerazy może osiągnąć 4000 rubli.

Funkcje PCR

Dzięki reakcji łańcuchowej polimerazy nawet niewielka ilość materiału biologicznego umożliwia oszacowanie miana wirusa we krwi, to znaczy obliczenie stężenia patogenów w jednym mililitrze cieczy.

Wraz z pojawieniem się PCR, rozpoznanie zapalenia wątroby było znacznie prostsze. Analiza umożliwia identyfikację HCV RNA, aby ustalić etap procesu zakaźnego i infekcyjność nosiciela wirusa.

Istnieje kilka rodzajów diagnostyki genetycznej:

  1. analiza jakościowa PCR dla zapalenia wątroby typu C - potwierdza obecność lub brak obecności HCV we krwi badanego:
  2. ilościowe, dzięki czemu możliwe jest obliczenie stężenia wirusów i ustalenie stadium choroby. Wynik podano w IU / ml lub kopiach / ml (w zależności od laboratorium);
  3. genotypowanie jest niezbędne do określenia genotypu HCV. Jest to wymagane do dokładnego wyboru leków, które będą najbardziej skuteczne w tym przypadku. Analiza pośrednio wskazuje na nasilenie patologicznego procesu w wątrobie. Tak więc, z trzecim genotypem patogenu najczęściej obserwuje się stłuszczenie, którego rozwojem jest gromadzenie się tłuszczu w hepatocytach (ich komórkach). Ponadto rodzaj wirusa wpływa na wynik i czas trwania kursu terapeutycznego.

Jakościowa analiza PCR dla zapalenia wątroby typu C

Pierwszym krokiem w laboratorium jest zbadanie materiału biologicznego pod kątem obecności HCV RNA. Należy pamiętać, że analiza jakościowa zapalenia wątroby typu C ma pewien poziom wrażliwości i dlatego nie zawsze daje właściwą odpowiedź. W takim przypadku zaleca się powtórzenie diagnostyki laboratoryjnej przy użyciu innych odczynników.

Aby uzyskać wiarygodne wyniki, należy zastosować system testowy o czułości co najmniej 50 IU / ml.

Wynik diagnozy może być "pozytywny" lub "negatywny". Jeśli patogen nie zostanie wykryty we krwi, badanie kończy się. Po wykryciu czynnika chorobotwórczego w próbce, przeprowadza się następnie ilościową analizę miana wirusa.

Odpowiedź fałszywie ujemną uzyskuje się, gdy proces technologiczny zostaje przerwany, na przykład, aktywne składniki, które gnębią budowę kopii patogenu przedostają się do środowiska. W związku z tym nie można wyświetlić prawdziwego obrazu krwi, z powodu której nie zdiagnozowano infekcji człowieka.

Fałszywie dodatni wynik można uzyskać, jeśli probówka do pobierania materiału biologicznego, a także środowisko do badania, zostały zanieczyszczone. Ponadto taka odpowiedź na analizę jest możliwa przy mieszanym zakażeniu, gdy na wątrobę wpływa kilka wirusów, na przykład wirusowe zapalenie wątroby typu C i D.

Wskazania do badań jakościowych

Lekarz może przydzielić pacjentowi badanie jakościowe w celu wykrycia RNA wirusa zapalenia wątroby typu C:

  • po otrzymaniu pozytywnej lub wątpliwej odpowiedzi immunotestu enzymatycznego;
  • do weryfikacji diagnozy;
  • określenie miana wirusa;
  • inscenizacja stadium choroby;
  • diagnoza mieszanej infekcji. Często wirusowe zapalenie wątroby typu C atakuje wątrobę w tym samym czasie co wirus "D";
  • określenie taktyki terapeutycznej z uwzględnieniem genotypu patogenu;
  • ocena dynamiki zmian na tle leczenia lekami przeciwwirusowymi.

Zalety reakcji łańcuchowej polimerazy obejmują:

  1. wysoka czułość techniki, która pozwala ustalić fakt infekcji na etapie przedklinicznym;
  2. identyfikacja materiału genetycznego patogenu, a nie przeciwciał;
  3. możliwość ustalenia podtypu czynnika chorobotwórczego;
  4. wysoka prędkość diagnostyki, ponieważ nie jest konieczne wysiewanie materiału na pożywce, ale wystarczające jest stosowanie określonych układów testowych. Osoba otrzymuje wynik po 5 godzinach;
  5. uniwersalność. Analiza umożliwia identyfikację dowolnego materiału genetycznego (RNA, DNA). Z tego powodu lekarz może potwierdzić zapalenie wątroby typu C i inne rodzaje choroby (B);
  6. możliwość wykrycia utajonej infekcji.

Badania ilościowe

W badaniu krwi z reakcją łańcuchową polimerazy możliwe jest obliczenie liczby patogenów w ustalonej objętości materiału biologicznego. Wskaźnik przedstawiono w IU / ml. Dzięki analizie możliwe jest ustalenie stopnia infekcyjności pacjenta, określenie stadium procesu zakaźnego, a także ocena skuteczności terapii lekowej.

Na podstawie PCR ekspert decyduje, które dawki leków mogą blokować rozprzestrzenianie się patogenów. Ponadto określa się czas trwania leczenia przeciwwirusowego i prognozę na całe życie. Ważne jest, aby pamiętać, że systemy testowe są bardzo czułe, więc metoda ta umożliwia potwierdzenie infekcji u ludzi nawet na etapie przedklinicznym.

Genotypowanie

Biorąc pod uwagę zdolność czynnika wywołującego do mutacji, do określenia taktyki leczenia i wyboru leków przeciwwirusowych, potrzebny jest jej genotyp. Na przykład leczenie zapalenia wątroby typu HCV 1 trwa 48 tygodni, z pozytywnym trendem obserwowanym tylko w 60% przypadków. Genotypy 2 i 3 mają bardziej korzystne rokowanie. Leki przeciwwirusowe są przepisywane przez 8 miesięcy, a ich skuteczność sięga 85%.

Według danych statystycznych, w większości przypadków HCV 1, 2 i 3 są zarejestrowane na terytorium Federacji Rosyjskiej.

Podczas odczytywania wyników badań laboratoryjnych można wskazać taką odpowiedź - "nie wpisano". Oznacza to, że wirus krąży w układzie krążenia pacjenta, który nie może zostać rozpoznany przez system testowy. Wynik analizy w tym przypadku wskazuje na infekcję osoby nietypowej dla danego obszaru geograficznego czynnika sprawczego.

Jak uzyskać wiarygodne wyniki?

Aby jakościowe badania PCR nad wykrywaniem RNA czynnika przyczynowego zapalenia wątroby typu C wykazały prawidłowe wyniki, konieczne jest spełnienie wymagań dotyczących przygotowania do diagnostyki laboratoryjnej:

  1. pobieranie krwi odbywa się na czczo, a "głodna" przerwa nie powinna być krótsza niż 8 godzin;
  2. dwa dni przed badaniem zaleca się zaprzestać picia alkoholu i odmówić dania ostrego, tłustego i wędzonego;
  3. znieść wprowadzenie leków, które zmniejszają krzepliwość krwi, takich jak heparyna. Jeśli te leki są przepisywane z powodów związanych z życiem, należy o tym powiadomić lekarza. Ponadto specjalista powinien być świadomy dopuszczenia innych leków, które mogą wpływać na wynik testu laboratoryjnego;
  4. W przeddzień zebrania materiału biologicznego zabiegi fizjoterapeutyczne nie powinny być wykonywane i poddawane silnemu wysiłkowi fizycznemu.

Na wyniki analizy może mieć wpływ nie tylko osoba, która oddaje krew, ale także inne czynniki, a mianowicie:

  • uboga krew;
  • nieprzestrzeganie zaleceń dotyczących transportu materiału biologicznego;
  • niewystarczające szkolenie pracowników laboratoriów;
  • nieprzestrzeganie technik badawczych;
  • wprowadzenie antykoagulantów (heparyny) w przeddzień pobierania próbek krwi. Ta grupa leków zmniejsza koagulację, co spowalnia pracę odczynników.

W różnych laboratoriach odpowiedź diagnostyczna może nieznacznie różnić się, ale błędy te nie wpływają na końcowy wynik badania.

Szczególną uwagę zwraca się na typy układów testowych stosowanych w laboratorium. Często preferowane są reagenty o wysokiej czułości. Jest to ważne dla pacjentów z małym wirem, ponieważ jest to trudne do wykrycia.

Jak często wykonywany jest test laboratoryjny?

Przede wszystkim reakcję łańcuchową polimerazy prowadzi się u osób, które w teście immunologicznym przebadano pod kątem obecności przeciwciał przeciwko wirusowi zapalenia wątroby. W tym przypadku jest on wyznaczony do potwierdzenia faktu zakażenia danej osoby i ustalenia stadium choroby. Ponadto analiza pozwala określić podtyp wirusa, co jest szczególnie ważne przy wyborze leków.

Kolejny okres obowiązkowych badań laboratoryjnych to 3 miesiące od rozpoczęcia leczenia przeciwwirusowego. Diagnoza daje możliwość oceny skuteczności leków, dostosowania dawki lub zastąpienia ich.

Oprócz podstawowych analiz PCR można wykonać dodatkowo w 4 i 24 tygodniu od rozpoczęcia leczenia. Pozytywne rokowanie choroby potwierdza zmniejszenie miana wirusa po trzech miesiącach terapii. Na przykład powinna zmniejszyć się z 1 miliona juntów / ml do kilkuset tysięcy.

Jeśli stężenie czynników chorobotwórczych we krwi pozostaje na tym samym poziomie lub nieznacznie wzrasta, oznacza to nieskuteczność środków antywirusowych i wymaga ich zastąpienia. Przy pomocy PCR po zakończeniu leczenia możliwe jest potwierdzenie powrotu pacjenta do zdrowia.

Aby prawidłowo zinterpretować wyniki diagnostyki laboratoryjnej, wymagana jest konsultacja z hepatologiem lub specjalistą chorób zakaźnych. Biorąc pod uwagę dużą częstość występowania fałszywych odpowiedzi w teście ELISA, analizę wykorzystuje się wyłącznie do wstępnego badania przesiewowego. W celu dokładniejszego zbadania pacjenta stosuje się reakcję łańcuchową polimerazy.

Jak wyjść z WZW typu C z prawdopodobieństwem 97%?

Obecnie nowoczesne leki i nowa generacja sofosbuvir daklataswir z 97-100% prawdopodobnie na zawsze uleczy cię z wirusowym zapaleniem wątroby typu C. Najnowszy lek jest dostępny w języku rosyjskim na oficjalny przedstawiciel indyjskiego farmgiganta Zydus Heptiza. Zamówione produkty zostaną dostarczone przez kuriera w ciągu 4 dni, płatność po odbiorze. Uzyskaj bezpłatną konsultację na temat stosowania nowoczesnych leków, a także dowiedz się o metodach zakupu na oficjalnej stronie dostawcy Zydus w Rosji.

Rnk nie znalazł tego, co to znaczy

"Wykrywanie genów wirusa zapalenia wątroby typu C (HVC) we krwi pacjenta jest drugim etapem laboratoryjnej diagnozy tej zakaźnej patologii. W celu wykrycia czynnika, który nie ma błony komórkowej, a zatem antygenów powierzchniowych, stosuje się metodę łańcuchowej reakcji polimerazy. Za pomocą tej metody jest to bezpośrednio cząsteczka, w której zakodowana jest cała jej informacja genetyczna - RNA.

RNA - kwas rybonukleinowy wraz z DNA jest częścią komórek wszystkich żywych organizmów. Wirus zapalenia wątroby typu C zawiera cząsteczkę RNA i ma zdolność do jej mutowania.

Badanie na obecność genomu HVC zwykle podaje się po przeprowadzeniu ogólnego, biochemicznego testu krwi i uzyskuje się pozytywną odpowiedź przeciwciał (anty-HVC).

Co to znaczy?

Test na przeciwciała przeciw HVC jest badaniem przesiewowym, tzn. Może być wykorzystany do badania dużej populacji ludzi (lekarze, kobiety w ciąży, pacjenci szpitali, dawcy, osoby zażywające narkotyki drogą iniekcji oraz osoby zakażone wirusem HIV). Negatywny wynik analizy laboratoryjnej anty-HVC sugeruje, że nie było odpowiedzi immunologicznej na wirusa we krwi pacjenta. Negatywny wynik można uzyskać w takich przypadkach:

Jeśli dana osoba nigdy nie była zarażona wirusem zapalenia wątroby typu C.

Jeśli czułość laboratoryjnego układu badawczego jest niższa niż stężenie anty-HVC.

Jeśli infekcja wystąpiła mniej niż 2 miesiące temu, a anty-HVC we krwi nadal nie wystarcza do ustalenia. Z fałszywie ujemną odpowiedzią ze względu na czynnik ludzki.

Jeśli zostanie stwierdzone, że wykryto przeciwciała przeciwko HVC u pacjenta, oznacza to, że wirus zapalenia wątroby typu C znajdował się w organizmie osobnika w czasie badania lub był we krwi jakiś czas temu. Przy dodatnim wyniku na anty-HVC, konieczne staje się przeprowadzenie dodatkowych testów laboratoryjnych, które wykrywają materiał genetyczny samego patogenu, określają stężenie jego genów (obciążenie wirusem, wiremię) i ustalają genotyp.

Analiza dla RNA wirusa zapalenia wątroby typu C.

Genom HVC w laboratorium można wykryć za pomocą kilku badań:

rozgałęziony DNA (p-DNA);

amplifikacja transkrypcji (TMA);

reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR).

Metoda p-DNA jest niedrogą i prostą metodą wykrywania wirusowego genomu u dużej liczby badanych osób. Jego główną wadą jest mała czułość: wykrywa HVC tylko w stężeniu powyżej 500 IU / ml.

Metoda amplifikacji transkrypcji wykrywa kwasy nukleinowe wirusa w surowicy krwi. Analiza ma wysoką czułość (5-10 IU / ml), ale nie została jeszcze wystarczająco wprowadzona do wszechobecnej praktyki laboratoryjnej.

Metoda PCR w Rosji jest najczęstszym i przystępnym badaniem laboratoryjnym o wysokiej czułości (od 50-60 IU / ml).

Test PCR przeprowadza się w dowolnym laboratorium klinicznym, które ma odpowiednią akredytację. Bardzo ważnym niusem tej metody diagnostycznej, która wpływa na wynik analizy, jest czułość systemu testowego stosowanego w laboratorium. Na przykład czułość diagnostyki 60 jm / ml, jak w laboratoriach Invitro, pozwala wykryć wirusowy RNA 3 miesiące po zakażeniu. Przy niskiej czułości systemu testowego nie można wykryć genów patogenu nawet po 4 miesiącach od zakażenia.

RNA wirusa zapalenia wątroby typu C: metoda PCR

Metoda PCR ma wiele zalet w porównaniu z innymi testami laboratoryjnymi do wykrywania genów HVC:

wysoka czułość. Metoda pozwala na oznaczenie materiału genetycznego patogena nawet przy jego minimalnym stężeniu w próbce;

większa specyficzność. Identyfikuje geny wirusa o określonym genotypie spośród różnych DNA i RNA innych patogenów, co pozwala na genotypowanie patogenu;

szybkość. Brak długiego procesu uprawy patogena skraca czas uzyskania wyniku do kilku godzin; uniwersalność analizy.

Uniwersalna procedura badania pozwala na jednoczesne wykorzystanie jednej ludzkiej próbki krwi do wykrywania materiału genetycznego różnych patogenów. Te zalety pozwalają uznać PCR za "złoty standard" laboratoryjnej diagnostyki wirusowego zapalenia wątroby typu C wraz z enzymatycznym testem immunologicznym dla anty-HVC.

PCR to badanie stosowane do oznaczania genów HVC we krwi badanej osoby. Badanie składa się z kilku etapów:

Pobieranie próbek biomateriału.

Pomnóż wzrost stężenia kopii RNA w wybranej próbce.

Wykrywanie materiału genetycznego za pomocą specjalnych systemów testowych.

Po pobraniu próbek krwi żylnej, pacjent poddawany jest sztucznej inicjacji procesu wielokrotnej replikacji (amplifikacji, kopiowania) genów HVC.

W tym celu temperatura wewnątrz probówki z biomateriałem zmienia się kilka razy w określony sposób. Kiedy liczba kopii RNA w probówce osiąga wymaganą wartość, patogen jest wykrywany za pomocą specjalnych testów diagnostycznych.

jakość (wykrywa obecność wirusa),

ilościowe (określa stężenie genów wirusowych na jednostkę objętości)

genotypowy (określa genotyp patogenu).

RNA wirusa zapalenia wątroby typu C: analiza jakościowa

Zadaniem jakościowej PCR jest określenie obecności HVC w prezentowanym biomateriału. Badanie to zwykle przeprowadza się w celu przesiewowego rozpoznania choroby lub identyfikacji nosiciela. Przypisz go po wykryciu anty-HVC metodą ELISA.

Aby zdiagnozować zapalenie wątroby typu C, wystarczy wykryć materiał genetyczny HCV jakościowo, to znaczy bez liczenia jego stężenia w objętości krwi. Wynikiem jakościowej reakcji PCR może być: "wykryto RNA" lub "RNA nie wykryto".

Dokładność metody odpowiada 95%. Jednocześnie dokładność testów diagnostycznych sięga 100%, a 5% to czynnik ludzki, który zawsze jest obecny w badaniach laboratoryjnych. Aby uniknąć fałszywie ujemnych analiz, szczególnie u osób z niską wiremią, konieczna jest wysoka czułość systemu diagnostycznego zastosowanego w badaniu. Czułość systemu testowego nie powinna być mniejsza niż 60 IU / ml.

RNA wirusa zapalenia wątroby typu C: analiza ilościowa

Analiza ilościowa jest przewidziana, gdy konieczne jest poznanie poziomu wiremii w ciele ludzkim. Wskazania do tego badania to:

pozytywny wynik jakościowego PCR pod warunkiem, że wykrywane są przeciwciała przeciwko wirusowi;

ustalenie stadium patologii;

definicja ładunku wirusa w zapaleniu wątroby;

wybór kombinacji leków przeciwwirusowych;

Monitorowanie odpowiedzi wirusowej na trwającą terapię przeciwwirusową;

ocena prawdopodobieństwa przejścia ostrego zapalenia wątroby typu C w stan przewlekły.

Wynik analizy wyrażono w IU / ml (jednostki międzynarodowe w 1 ml surowicy) lub w kopiach / ml (liczba kopii genów wirusa w 1 ml surowicy). Ilościowa reakcja PCR nie ma żadnych norm: zwykle gen HVC w ludzkiej krwi nie powinien być wykryty. Wyniki badania są porównywane z wartościami referencyjnymi ustalonymi dla danego stopnia miana wirusa.

A więc wskaźniki (w IU / ml):

poniżej 4 × 10 * 5 uważa się za niską wiremię;

od 4 × 10 * 5 do 8 × 10 * 5 - średnia;

więcej niż 8 × 10 * 5 - wysoki.

Im więcej kopii wirusowego RNA we krwi, tym bardziej agresywna choroba i większe ryzyko przeniesienia wirusa na inne. Jednak poziom obciążenia wirusowego nie jest jedynym wskaźnikiem, który wpływa na ciężkość przebiegu patologii i dalsze rokowanie dla pacjenta: ważny jest również genotyp patogenu.

Ustanowienie genotypu jest niezbędne do wyznaczenia właściwego schematu leczenia. Określa również rokowanie dla zdrowia i życia pacjenta. Na przykład wirus 3 genotypu często prowadzi do zwłóknienia lub marskości wątroby, w porównaniu do pacjentów z jednym genotypem.

Wirusowe zapalenie wątroby typu C: analiza i interpretacja

RNA diagnoza zapalenia wątroby typu C, nie mogą być wprowadzane wyłącznie na podstawie wyników tylko jakościowej i / lub ilościowej analizy PCR: HVC i określenia obciążenia wirusem nie jest wystarczające, aby przypisać odpowiedniej terapii przeciwwirusowej. Potencjalny pacjent musi być wszechstronnie zbadany (klinicznie, laboratoryjnie, instrumentalnie), aby uzyskać obiektywny obraz patologii. Prawidłowo wyznaczyć kompleks badań w celu ustalenia rozpoznania zapalenia wątroby typu C, a następnie prawidłowo rozszyfrować wyniki może tylko lekarz.

nie wykryto zapalenia wątroby z RNA

Popularne artykuły na ten temat: nie wykryto zapalenia wątroby z RNA

Przewlekłe wirusowe zapalenie wątroby to grupa chorób zakaźnych, które rozprzestrzeniają się na całym świecie w alarmującym tempie.

Historię pracy wirusowego zapalenia wątroby (SH), rozpoczyna się w 1965 roku, kiedy B. Blumberg z badaniem australijskiego Aborigine surowicy krwi odkryto antygen, tworząc linię wytrącenie w reakcji z surowicą chorego na hemofilię.

Autoimmunologiczne zapalenie wątroby (AIH) - martwicze przewlekłych zapalnych chorób wątroby o nieznanej etiologii, charakteryzuje okołowrotne lub szerszym zapalenia wątroby, hipergammaglobulinemia i obecności pojawieniem szerokości.

Na Ukrainie wirusowe zapalenie wątroby typu A można słusznie nazwać infekcją wieku dziecięcego.

Taktyka postępowania z pacjentami z zakażeniem wirusem zapalenia wątroby typu C. Zalecenia kliniczne Europejskiego Stowarzyszenia Badań Chorób Wątroby (EASL) 2015.

Taktyka postępowania z pacjentami z zakażeniem wirusem zapalenia wątroby typu C. Zalecenia kliniczne Europejskiego Stowarzyszenia Badań Chorób Wątroby (EASL) 2015.

Taktyka postępowania z pacjentami z zakażeniem wirusem zapalenia wątroby typu C. Zalecenia kliniczne Europejskiego Stowarzyszenia Badań Chorób Wątroby (EASL) 2015.

Taktyka postępowania z pacjentami z zakażeniem wirusem zapalenia wątroby typu C. Zalecenia kliniczne Europejskiego Stowarzyszenia Badań Chorób Wątroby (EASL) 2015.

Obecnie Ukraina ma niezwykle alarmującą sytuację dotyczącą zakażenia wirusem HIV. W 2005 roku w naszym kraju oficjalny wskaźnik infekcji wirusem HIV wynosił 29,4 przypadków na 100 000 mieszkańców.

Rozpoznanie wirusa zapalenia wątroby typu C.

Wirus zapalenia wątroby typu C (HCV) to wirus zawierający RNA z rodziny Flaviviridae. Ta infekcja jest zdolna do rozmnażania się w komórkach krwi (monocyty, neutrofile, limfocyty B i makrofagi), a także do uszkadzania komórek samej wątroby - hepatocytów. Ze względu na wysoki stopień aktywności mutacji, ten typ zapalenia wątroby jest w stanie uniknąć wpływu ludzkiego układu odpornościowego.

Istnieje 11 genotypów i masa podtypów takiego wirusa, które różnią się stopniem uszkodzenia wątroby i wpływają na czas leczenia zapalenia wątroby. Taka różnorodność wirusowego zapalenia wątroby typu C wymaga różnych metod terapii przeciwwirusowej. Na przykład zapalenie wątroby z 1. i 4. genotypem powinno być leczone 48 tygodni, a dla przebiegu terapii przeciw wirusom 2. i 3. gatunku, może to potrwać tylko 24 tygodnie.

Po szybkim teście na zapalenie wątroby typu C dało wynik pozytywny, przeprowadzono analizę PCR w celu identyfikacji RNA wirusa w próbkach krwi.

Diagnostyka PCR

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) jest eksperymentalną techniką wykrywania wirusów. Taka analiza dla zapalenia wątroby typu C pozwala na znaczne zwiększenie stężenia niektórych fragmentów DNA lub RNA w przedłożonych próbkach. Dzięki temu można je rozpoznać, a nawet policzyć.

Ten test na zapalenie wątroby typu C przeprowadza się zgodnie z następującą procedurą:

  1. Próbkę krwi (materiał genetyczny), która może zawierać pożądany gen wirusa zapalenia wątroby, wprowadza się do probówki. Na jej miejsce specjalne substancje - startery, są to fragmenty o niewielkiej długości od pożądanego genu, syntetyzowane chemicznie. W tym naczyniu dodaje się także polimerazę DNA lub RNA, jest ona zdolna do tworzenia łańcuchów kwasu nukleinowego, całkowicie identycznych z pierwotnymi. Do otrzymanej kompozycji dodaje się selekcję wolnych nukleotydów, które są specjalnym materiałem budowlanym dla DNA i RNA, z których jeden zawiera drobne cząstki radioaktywnego fosforu.
  2. Uzyskana mieszanina jest najpierw podgrzewana do 95 stopni, dzięki czemu z powodu tego efektu obie helisy DNA są osłabione w normalnym stanie.
  3. Aby kontynuować analizę, lek ochładza się, w tym momencie startery są przyłączone do pożądanego regionu genomu wirusa zapalenia wątroby, nie pozwalając DNA na utworzenie podwójnej helisy. Gdy mieszanina ochładza się, polimeraza poszukuje pojedynczych nici nukleotydów. Podczas przyłączania tego enzymu ślizga się wzdłuż nici DNA (jak blok za pomocą liny), a na podwójnej helisie nie jest w stanie "pracować", w tym celu mieszanina jest podgrzewana.
  4. Aby przedłużyć analizę, wykonuje się ponowne ogrzewanie, co ponownie prowadzi do rozdzielenia łańcuchów nukleotydowych. Podczas wykonywania takich cykli PCR w próbce liczba poszukiwanych genów zapalenia wątroby wzrasta w proporcji geometrycznej, a pozostałe materiały genetyczne są wytwarzane (formowane) tylko w liniowej regularności.
  5. Aby zakończyć badanie, roztwór oczyszcza się z resztkowych cząstek nukleotydów. Są one rozdzielane przez elektroforezę, z rozdziałem molekularnych łańcuchów DNA przez parametry masy cząsteczkowej. Takie testy na zapalenie wątroby za pomocą PCR pozwalają określić, czy pożądane geny wirusa są obecne w badanej próbce, czy nie.

Zaletą tego testu jest próg bardzo wysokiej czułości reakcji PCR. Taka technika do prowadzenia diagnostyki, najlepiej, wymaga tylko jednego genomu wirusa dla całej próbki.

Ponadto taka reakcja PCR jest całkowicie specyficzna. W każdym z genów znajduje się unikalna sekwencja nukleotydów, która, podobnie jak odcisk palca, nie może być nigdzie powtarzana. W tej analizie wirusowego zapalenia wątroby typu C, startery syntetyzuje się w taki sposób, aby całkowicie odpowiadały unikalnym częściom pożądanych genów, których nie ma żadna inna sekwencja.

Technika ta umożliwia również analizę i określenie zapalenia wątroby w c, pomagając ustalić ostateczną diagnozę.

Taka analiza laboratoryjna pozwala uzyskać więcej informacji niż tylko obecność lub brak RNA HCV lub innego typu w próbkach krwi. Określając parametr promieniowania radioaktywnego, istnieje również możliwość ujawnienia, jak bardzo pożądany materiał genetyczny został pierwotnie znaleziony w badanej próbce. To pozwala nam określić parametr tak zwanego ładunku wirusowego - stężenie cząstek RNA wirusa zapalenia wątroby w określonej objętości.

Jakościowa analiza PCR

Ta analiza pozwala określić obecność wirusa zapalenia wątroby w próbkach krwi. Trzeba to zrobić dla wszystkich osób, u których stwierdzono przeciwciała przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby.

W wyniku takiego badania mogą występować tylko dwie wartości:

  • "Odkryto". Taki pozytywny wynik testu interpretuje się następująco: fragmenty RNA wirusowego zapalenia wątroby znaleziono w analizowanej próbce z materiału biologicznego. Z tego wynika, że ​​istniał fakt zakażenia pacjenta tym wirusem. Może to wskazywać, że czynnik powodujący zapalenie wątroby mnoży się w organizmie i infekuje nowe komórki, niszcząc wątrobę.
  • "Nie wykryto". Wynik ten wskazuje, że próbki, które analizuje się w warunkach laboratoryjnych, znaleziono fragmenty RNA, które jest specyficzne dla wirusa zapalenia wątroby typu C. Istnieje również możliwość, że stężenie RNA wirusa patogenów w próbce była tak mała, że ​​badania nie było w stanie określić. W takich przypadkach mówi się, że poziom stężenia jest poniżej progu czułości testu.

Taki test może również być fałszywie dodatni lub fałszywie ujemny, z powodu zanieczyszczenia biomateriału lub obecności w próbkach określonych substancji, które reagują ze składnikami chemicznymi niezbędnymi do analizy.

Należy podkreślić, że w ostrych fazach zapalenia wątroby typu C badanie jakościowe z wykorzystaniem metody PCR może wykryć jego RNA już po 1-2 tygodniach od momentu zakażenia organizmu. Oznacza to, że chorobę można zidentyfikować na długo przed wystąpieniem jej zewnętrznych objawów lub pojawienia się przeciwciał przeciwko zapaleniu wątroby w ciele.

Pobieranie krwi (z żyły) korzystnie wykonuje się na czczo.

Ilościowa analiza PCR

Za pomocą tej analizy określ poziom stężenia wirusa zapalenia wątroby u pacjenta (miano wirusa). Taki test należy przedłożyć w celu oszacowania ilości RNA wirusa w jednostce o określonej objętości.

Analiza testów na zapalenie wątroby typu c przeprowadzonych za pomocą tej techniki może mieć następujące wyniki:

  • Wskaźnik ilościowy (w liczbach)

Stężenie wirusa (liczba) podano w postaci liczbowej. W tym celu stosuje się różne jednostki: ME / ml (jednostka międzynarodowa na mililitr) lub kopie / ml (liczba kopii wirusa RNA w mililitrach). Średnio 1 IU / ml odpowiada 4 kopiom / ml, ponieważ różne systemy testowe mają różne współczynniki konwersji dla takich jednostek.

Niskie miano wirusa uważa się za mniej niż 400 000 IU / ml dla tego testu, a wysokie jest 8000000 IU / ml.

Ta ocena ilościowa pozwala określić poziom zakaźności choroby ("infekcyjność") pacjenta. Im bardziej ten wskaźnik analizy, tym większe ryzyko przeniesienia patogenu na inne osoby (z kontaktem seksualnym lub drogą pionową).

Ten werdykt oznacza, że ​​metoda ilościowa nie może wykryć wirusa zapalenia wątroby typu RNA, ale sam wirus jest obecny w organizmie, tylko w bardzo niskim stężeniu. Zostało to potwierdzone przez przeprowadzenie dodatkowej jakościowej analizy PCR, a jego pozytywny wynik wskazuje na obecność zapalenia wątroby.

  • Wynik "Nie wykryto"

    Ta pozytywna interpretacja analizy sugeruje, że sam test ilościowy w próbce krwi nie był w stanie wykryć cząstek RNA wirusa zapalenia wątroby typu C.

  • Analiza ilościowa PCR, przeprowadzona w różnych okresach terapii antywirusowej (1, 4, 12 i 24 tygodnie) pozwala ocenić skuteczność leczenia i dokonać niezbędnych korekt.

    Specyfika analizy

    Test ten należy przedstawić w celu określenia różnych genotypów zapalenia wątroby typu C. Obecnie znanych jest 11 genotypów tego patogenu i wiele podtypów. Genotypy wirusowego zapalenia wątroby typu C pierwszego, drugiego i trzeciego gatunku są powszechne w naszym kraju. W laboratoriach wykrywa wiele podtypów tych gatunków: 1a, 1b, 2a, 2b i 3, 4, 5, 6 genotypów z różnymi modyfikacjami podtypów. W przypadku wszystkich tych zapalenia wątroby specyficzność wykrywania wynosi 100%.

    Wyjaśnienie modyfikacji genotypu pozwala wybrać odpowiednie leczenie. Obecność określonego rodzaju genotypu u pacjenta nie wskazuje, że choroba jest łatwiejsza lub trudniejsza, są to tylko odmiany wirusa zapalenia wątroby i nie więcej.

    W przypadkach gdy laboratorium nie może wyizolować genotypu wirusa, można uzyskać wynik: "Nie jest wpisany. Badano genotypy: takie i takie (na przykład 1a, 2b, 3av). Ten transkrypt wskazuje, że w tym laboratorium nie było odpowiednich odczynników, które mogłyby określić genotyp wirusa zapalenia wątroby. W badaniu sprawdzono wirusy podane na liście, ale ich zgodność z próbkami RNA nie została wykryta.

    Aby postawić ostateczną diagnozę, tylko jeden rodzaj analizy jest niewystarczający. Każdy z testów może dać fałszywie dodatni wynik. Przeprowadzono złożone badanie w celu określenia dokładnego rodzaju zapalenia wątroby i stopnia zakażenia tą infekcją organizmu. W tym samym czasie wykonuje się biopsję wątroby i testowanie jej enzymów: ALAT, ASAT, a także alkaliczną fosfatazę i LDH. Można również wykonać badanie bilirubiny i analizę wskaźnika protrombiny.

    Tylko kompleks takich testów i testów laboratoryjnych, z ogólną analizą stanu pacjenta, pomoże określić obecność zapalenia wątroby w ciele, jego kształt, a także stopień nasilenia. Na ich podstawie lekarz może ustalić dalsze leczenie i ustalić rokowanie dla pacjenta.


    Pokrewne Artykuły Hepatitis